Основні принципи та етапи приготування гістологічних препаратів.

Гістологічний препарат є основним об’єктом вивчення.

Він повинен бути тонким (5-10 мкм), прозорим, легко пропускати пучок світла і може являти собою тонкий зріз органу, тотальний препарат (напр., м’яка мозкова оболонка), відбиток органу (напр., відбиток печінки або селезінки), мазок (напр., мазок крові або кісткового мозку), плівку з тканини (пухка сполучна тканина).

Класичним і основним об’єктом дослідження в гістології продовжує залишатися фіксований і пофарбований зріз тканини або органу.

Процес виготовлення гістологічного препарату включає наступні основні етапи:

1) взяття матеріалу і його фіксація;

2) ущільнення матеріалу;

3) виготовлення зрізів;

4) фарбування зрізів;

5)висновок зрізів у бальзам або інші прозорі середовища (полістирол, целлоидин).

Фіксація микропрепарата

Фіксація полягає в тому, що взятий з органу маленький шматочок (3-5 мм) занурюють у фіксатор (формалін, 700 спирт і ін). Фіксація запобігає процеси розкладання і тим самим сприяє збереженню цілісності структур, коагуляції білків і припинення життєдіяльності, а структури стають мертвими, фіксованими.

Ущільнення микропрепарата

Для ущільнення шматочків застосовують різні речовини, найчастіше парафін, целлоидин, органічні смоли. Залиті в ущільнюючі середовища шматочки набувають пластичність, необхідну для приготування з них тонких зрізів.

Виготовлення зрізів

Приготування зрізів товщиною від 5 до 50 мкм виробляють на спеціальних апаратах – микротомах.

Фарбування зрізів

Фарбування зрізів застосовують для збільшення контрастності окремих гістологічних структур при розгляданні їх в мікроскопах. Методи фарбування гістологічних зрізів дуже різноманітні. При обробці зрізів барвниками відбуваються складні хімічні і фізичні процеси.

Гістологічні барвники поділяють на кислі, основні та нейтральні.

Структури, добре окрашивающиеся кислими барвниками, називаються оксифильными, а окрашивающиеся основними барвниками – базофильными. Структури, що сприймають як кислі, так і основні барвники, є гетерофильными або нейрофильными. Найбільш часто вживані барвники – гематоксилін і еозин. Гематоксилін фарбує ядра клітин у фіолетовий колір, еозин – кислий барвник, що забарвлює цитоплазму в рожево-жовтий колір. Забарвлені препарати далі обезводнюють у спиртах зростаючої міцності і прояснюють у ксилолі.

Для тривалого зберігання гістологічний зріз укладають між предметним та покривним склом у бальзам або інші речовини. Готовий гістологічний препарат може зберігатися багато років і бути використаний для вивчення під мікроскопом.

Методи виявлення елементів нервової і еластичних тканин.

Нервову тканину для гістологічного дослідження заливають у парафін, целлоидин і желатин. Методика заливки в парафін і целлоидин ніяких особливостей обробки нервової тканини на цій стадії немає

Гистохимия.

Гистохимия, розділ гістології, вивчає хімічні властивості тканин тварин і рослин.

Задача Р. — з’ясування особливостей обміну речовин в тканинних клітинах (див. Клітка) та межуточных середовищах. Вона вивчає зміни властивостей клітин в процесі розвитку, зв’язку між роботою, метаболізмом та оновленням зрілих клітин і тканин. Основний принцип гістохімічних методик зв’язування певного хімічного компонента клітин з барвником або освіта забарвлення в процесі реакції. Ряд методів (цитофотометрия, люмінесцентна і інтерференційна мікроскопія) виходить з фізичних властивостей речовин. З допомогою різних гістохімічних методів можна визначити локалізацію і кількість багатьох речовин у тканини, їх метаболізм (тканинна авторадиография), згідно з субмикроскопической структурою (електронна Р.), активність ферментів. Перспективним напрямом є також імуногістохімія. Найбільш точні гістохімічні методи, що дозволяють досліджувати структури клітини, називають цитохимическими (див. Цитохимия).

Перші спеціальні гістохімічні дослідження належать французькому вченому Ф. Распайлю (1825-34). Інтенсивно Р. стала розвиватися з 40-х роках 20 ст., коли з’явилися надійні методи визначення в клітині білків, нуклеїнових кислот, ліпідів, полісахаридів, деяких неорганічних компонентів. За допомогою гістохімічних методик вдалося, наприклад, вперше показати зв’язок змін кількості РНК з синтезом білка і сталість вмісту ДНК в хромосомному наборі.